7.1 酵母菌的形态结构观察

目的要求

观察并掌握酵母菌的菌落特征、个体形态、生长及繁殖方式。

基本原理

酵母菌细胞一般成圆形、卵圆形、圆柱形或柠檬形。每种酵母细胞有其一定的形态大小。大多数酵母菌在平板培养基上形成的菌落较大而厚，湿润、较光滑，颜色较单调（多为乳白色，少有红色，偶有黑色）。酵母菌细胞核与细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大几倍到十几倍。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖。

实验材料

酿酒酵母（红酵母），无菌水，0.1%美蓝液，中性红染液，苏丹黑,二甲苯，0.5%蕃红，无菌水，显微镜，载玻片及盖玻片。

实验内容

(一)        菌落特征的观察

取少量酿酒酵母、红酵母划线接种在平板培养基上，28—30⁰C培养3d。观察菌落表面湿润或干燥，有无光泽、隆起形状，边缘的整齐度、大小、颜色等。

    （二）个体形态与出芽生殖

酵母菌细胞较大，观察时可不染色，用水浸片法观察，即在载玻片中央滴加一小滴无菌水或滴加0.1% 美蓝液一小滴，无菌操作用接种环取酿酒酵母少许（并注意酵母菌培养基结合是否紧密），置于无菌水或美蓝液中，使菌体与其混合均匀。将盖玻片斜置轻轻盖在液滴上。制片先用低倍镜，再换高倍镜观察酵母菌细胞的形状及出芽方式。

    （三）液泡的活体染色观察

在洁净的载玻片上加一滴中性红染液，用接种环取少许酿酒酵母与染液混匀，染色4—5min，加盖玻片在显微镜下观察。中性红是液泡的活体染色剂，在细胞处于生活状态时，液泡被染成红色，细胞质及核不着色。若细胞死亡，液泡染色消失，细胞质及核呈现弥散性红色。

    （四）脂肪粒染色观察

方法1：在载玻片上加一滴无菌水，用接种环取少许酿酒酵母制成涂片，自然干燥后滴加苏丹黑染色5min，水洗，自然干燥，滴加二甲苯脱色至涂片透明，干燥后滴加0.5%蕃红染液复染30s, 水洗，自然干燥后显微镜观察。脂肪粒成黑蓝色，细胞质为红色。

方法2：加一小滴苏丹黑液于洁净的载玻片上，挑取少许酵母菌体与之混匀，加盖玻片镜检，脂肪粒染成黑色。

结论与讨论

酿酒酵母及红酵母菌的菌落有哪些形态特征？

酿酒酵母菌的菌体、出芽方式及细胞中的脂肪粒、液泡形态如何？

酵母菌与细菌细胞在形态结构上有何区别？